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Biochrom30+氨基酸分析仪检测石斑鱼中水解氨基酸

Biochrom30+氨基酸分析仪检测石斑鱼中水解氨基酸

 

 

 

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摘要:

以石斑鱼为原料,使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明石斑鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为17753.114mg/100g,必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的40.63%,鲜味氨基酸占氨基酸总量的38.52%

 

 

 

 

 

一、样品前处理

1、         所用试剂

1、1        浓盐酸,浓度≥36%,优级纯

1、2        6mol/L 盐酸:500mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀。

1、3        水:去离子水

1、4        苯酚:须重蒸

1、5        17种氨基酸标准品

行号

氨基酸

行号

氨基酸

1

Asp       

天冬氨酸

2

Thr

苏氨酸

3

Ser       

丝氨酸

4

Glu

谷氨酸

5

Pro       

脯氨酸

6

Gly

甘氨酸

7

Ala       

丙氨酸

8

Cys

胱氨酸

9

Val       

缬氨酸

10

Met

蛋氨酸

11

Ile        

异亮氨酸

12

Leu

亮氨酸

13

Tyr

酪氨酸

14

Phe       

苯丙氨酸

15

His

组氨酸

16

Lys

赖氨酸

17

Arg

精氨酸




 

2、         前处理设备

1)     分析天平:感量分别为 0.0001g0.00001g

2)     水解管:耐压螺盖玻璃试管,体积为25mL

3)     匀浆机。

4)     无油真空泵

5)     干浴水解浓缩仪

6)     移液管

7)     0.22um滤膜

 

3、         样品制备(参考国标GB 5009.124-2016

原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏,采肉后清洗、沥干,在匀浆机中打成肉糜,于-18℃冰箱中冷冻保存,分析时取出解冻后使用。

 

4、         试样水解

称取含蛋白7.5-25mg的试样,加入水解管中,加入15mL 6mol/L盐酸,继续向水解管内加入苯酚3~4滴。冷冻3min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮气,重复抽真空-充入氮气3次后,在充氮气状态下拧紧螺盖。 将水解管放入干浴水解浓缩仪中,110°C水解22-24h,冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml容量瓶中,用移液管取适量样液,在干浴水解浓缩仪中50°C吹干,必要时加入少许水,重复吹干1-2次,加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解,振荡混匀后,吸取溶液通过0.22μm 滤膜后,转移至仪器进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用

 

二、分析方法描述(Biochrom 30+

氨基酸分析仪分析方法参数:

1)     色谱柱:Biochrom Na型阳离子交换树脂柱,4.6´20cm

2)     分离程序:

NO.

Time

Temp

Buffer

Pump

Nin

Rec

Commands

1

01:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF


2

00:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF

Reset

3

01:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF

Load

4

06:40

48

1

35.0ml/h

ON

ON


5

13:00

52

2

35.0ml/h

ON

ON


6

01:00

52

5

35.0ml/h

ON

ON


7

16:00

95

5

35.0ml/h

ON

ON


8

04:00

95

6

35.0ml/h

ON

ON


9

04:00

95

1

35.0ml/h

ON

ON


10

09:00

48

1

43.0ml/h

OFF

OFF


11

02:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF


End








 

3)     运行时间:经分析时间+再生时间 57min

4)     反应单元温度:135°C

5)     检测波长:570nm440nm同时检测。

 

 

三、样品中氨基酸含量的计算

   样品测定液氨基酸的含量按式(2)计算:

ci = cs /As ×Ai                 ……………………(2)

式中:

ci ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

Ai ———试样测定液氨基酸i的峰面积;

As ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;

cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)

 

试样中各氨基酸的含量按式(3)计算:

Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×109) ×100 ……………………(3)

式中:

Xi ———试样中氨基酸i的含量,单位为克每百克(g/100g);

ci ———试样测定液中氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

F ———稀释倍数;

V ———试样水解液转移定容的体积,单位为毫升(mL);

M ———氨基酸i的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol);

m ———称样量,单位为克(g);

109 ———将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数;

100 ———换算系数。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

附、石斑鱼分析图谱及做样结果


 

 

 

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